人小细胞肺癌细胞DMS114培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液

备注：使用无菌离心管收集培养基，并留作对比培养。若对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基[人生就是博-尊龙凯时]。

二、细胞处理步骤

在收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳处理方法。在使用过程中，先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。也请在显微镜下观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

（在传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以作对比，同时换液后拧松瓶盖）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：
若细胞密度未超过80%，则将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可直接进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，之后观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后添加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。

b. 细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使之脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱存放，若后期需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞贴壁不牢，在运输过程中可能发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期可进行对比培养）。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，并加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加入1-2 ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况：
- 运输途中如发生细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等情况，均可重发；
- 收到产品48小时内如发现细胞污染，请提供真实实验结果以便核实后重发；
- 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏后24小时内如大多数细胞未存活（需提供真实清晰细胞状态照片），可重发；
- 干冰冻存的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时未开封，如出现污染，可重发；
- 如果在7天内提供真实实验结果显示细胞活性问题，使用台盼蓝染色法检测并核实后重发；
- 收到当天和第2、3天请拍照，如果3天内未告知，视为产品合格。4-7天内出现问题需提供前三天照片和相关操作的详细步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判断责任，重发。

2）不予重发的情况：
- 客户造成细胞污染，无法重发；
- 客户操作不当导致细胞状态不佳，不予重发；
- 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发；
- 若细胞状态不佳但未提供前3天的照片，不予重发；
- 使用过程中如进行其它处理，不予重发；
- 收到后2天内未告知，不予重发；
- 视具体情况而定。