细胞转染是一项将外源性遗传物质导入目标细胞的核心技术,广泛应用于生命科学研究、药物开发及新药研发等领域。化学转染法是生物技术研究中常用的转染方式,其优势在于能够通过调节化学物质的浓度和作用时间,精准控制转染的效率和持续时间。
选择合适的转染试剂是实现成功有效细胞转染实验的关键!市场上转染试剂种类繁多,质量参差不齐,那么该如何挑选最适合的产品?以下是选择转染试剂的几点指南:
1. 根据实验目的
根据实验需求选择稳定转染或瞬时转染。虽然两者步骤相似,但外源基因的需求不同。稳定转染通常需要使用具有复制能力的质粒或病毒载体,且多采用脂质体类试剂使细胞通过内吞作用获得转染,而瞬时转染则常使用纳米聚合物类试剂。
2. 根据细胞种类
不同类型的细胞对转染效率的影响差异显著。例如,HEK293T细胞易于转染并且对载体选择的依赖性相对较低,因此常用于功能性蛋白和抗体的开发。然而,在肿瘤细胞或肿瘤药物研究中,许多癌细胞的转染效率较低,如肝癌细胞、肺癌细胞等,这对研究带来了很大的挑战。根据细胞类型的不同,贴壁细胞与悬浮细胞对转染试剂的需求也有所区别。
3. 根据基因类型
转染一般包括DNA和RNA两种形式。DNA转染主要用于导入外源DNA片段,实现基因表达和蛋白质合成,而RNA转染则主要导入干扰RNA以研究特定基因功能。不同的转染试剂在执行RNA和DNA转染时,其效果和细胞毒性有所不同,尤其是当DNA载体超过10,000bp时,目前许多转染试剂的有效性将受到严重限制。
4. 根据转染效果
理想的转染试剂应具有高效转染和低细胞毒性。高效转染确保更多外源基因能够导入细胞,而低细胞毒性则有助于提高细胞存活率,从而确保实验结果的可靠性。例如,某些脂质体转染试剂可能存在固有的细胞毒性,导致细胞死亡率在15%~30%之间。反之,细胞死亡率控制在15%以下的转染试剂通常竞争力更强。
5. 根据操作简便性
选择操作简便且省时的转染试剂能够显著节省实验时间成本。操作的便捷性通常体现在是否需更换培养基、转染试剂组成数量、孵育方式与时间、核酸溶液的稀释要求、是否需要辅助设备等方面。操作简便的转染试剂在设计多组平行对照实验时表现尤为突出,有助于节约实验材料和时间,简化实验步骤,提高实验效率。
在此,我们推荐人生就是博-尊龙凯时的佰唯基转染试剂1BGPNAM11/BGPNAM11Plus,该系列产品以纳米阳离子聚合物为主要成分,能够与带负电荷的核酸分子结合形成复合物,有效转染siRNA和质粒DNA。其转染效率高达95%,对HEK293/293T细胞表现优异,细胞毒性低,转染48小时后细胞活率可达85%。与此同时,BGPNAM11Plus可实现转染前后无需更换成无血清培养基,简化了操作流程,节约了时间和材料成本!
根据实验具体内容,选择适合的转染试剂,人生就是博-尊龙凯时的产品将助力您的基因工程研究!
实验干货
影响转染效果的主要因素如下:
- 抗生素:抗生素虽然对真核细胞一般无毒,但在阳离子脂质试剂的影响下可能增加细胞通透性,从而降低转染效果。
- 血清:血清影响复合物形成,降低转染效率。因此,最佳转染条件需视血清浓度而定。
- 细胞状态:转染实验最好使用经过1~2次传代的细胞,以保证细胞活力。
- 细胞密度:不同转染试剂对细胞密度的需求有所不同,通常贴壁细胞需达到60%~90%的汇合度。
- 核酸质量:高纯度、无内毒素的核酸能够显著提升转染效率。
针对大多数转染为何需更换培养基,主要原因包括转染试剂的毒性及对细胞生长的影响。长时间在转染试剂环境中可能导致细胞损伤。因此,在转染后4-6小时更换培养液以保护细胞健康是必要的。
希望以上信息能帮助您选择最佳的转染试剂,提升实验效率与成功率,助力科研进步!