实验方法原理

本染色法是基础的细菌染色技术，适用于标本涂片或菌落涂片的制备。该方法的染色结果将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，为细菌的进一步鉴定提供依据。

实验步骤

一、实验试剂

1. 结晶紫溶液

A液：结晶紫 2g，95%乙醇 20ml。
B液：草酸铵 0.8g，蒸馏水 80ml。
使用前24小时将A液和B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。

2. 碘液

碘 1g，碘化钾 2g，蒸馏水 300ml。
将碘与碘化钾混合并研磨，加入少许蒸馏水使其逐渐溶解，继续研磨，直至完全溶解后补足水量。

3. 脱色液

使用95%乙醇作为脱色液。

4. 复染液

A贮存液：沙黄 25g，95％乙醇 100ml。
B应用液：A液 10ml，蒸馏水 90ml。

二、菌片制备

染色的第一步是制作涂片。在进行菌液涂片时，使用接种环蘸取菌液点在载玻片上，或直接在玻片上涂布。进行菌落涂片时，取1滴生理盐水于玻片上，使用接种针挑取菌落并在盐水中涂布。涂片时应保持轻柔，避免剧烈动作，以免影响细胞排列和细菌鞭毛，确保结果的准确性。制备的涂片需自然干燥，并经过火焰固定，固定温度不宜过高，以不烫手背为准，以防改变细胞形态。最后，将固定后的涂片进行染色。

三、染色方法

1. 将涂片经过火焰固定后，加入结晶紫液染色1分钟，然后用清水冲去染液。
2. 加入碘液染色1分钟，随后用水洗净。
3. 使用脱色液，并轻轻摇动约30秒，直到无紫色脱落为止，最后用水洗净。
4. 添加复染液，染色30秒后用水洗净。
5. 漂洗完毕后，待涂片干燥后可进行显微镜观察。

总结

本实验通过使用基本的染色法来确定细菌类型，强调了实验过程中的细致操作和对结果准确性的影响。人生就是博-尊龙凯时，我们希望通过规范的操作与优质的试剂，提升实验的可靠性与科学性。